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海藻糖穩(wěn)定蛋白質(zhì)的保護(hù)機(jī)制

更新時間:2022-11-03   點(diǎn)擊次數(shù):1727次
  海藻糖是一種天然的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì),被認(rèn)為是一種出色的蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑,它能幫助酶在溶液中甚至是凍干狀態(tài)下保持活性。
  
  為詳細(xì)了解海藻糖的保護(hù)機(jī)制,我們研究了海藻糖在五種特征鮮明、物化性質(zhì)不一的蛋白質(zhì)溶液中的熱穩(wěn)定性。其中,RNaseA用作模型酶來分析在高溫孵育時海藻糖在保存酶活性上的作用。
  
  溶液pH2.5時,2M海藻糖能使相變溫度上升,RNase的Tm增加多達(dá)18℃,吉布斯自由能增加4.8kcal/mol。所有五種蛋白質(zhì)海藻糖溶液的蛋白質(zhì)變性熱容(ΔCp)降低了。
  
  ΔG的增加和ΔCp的降低共同使穩(wěn)定曲線(ΔGvs.T)上升并拓寬,指向了海藻糖穩(wěn)定蛋白質(zhì)的機(jī)制。我們還觀察到了這幾種蛋白質(zhì)溶液熱穩(wěn)定性與表面張力直接的關(guān)聯(lián),Wyman連鎖分析指出在1.5M濃度,4-7個海藻糖分子會在蛋白質(zhì)變性時從蛋白質(zhì)分子周圍排除。
  
  我們還發(fā)現(xiàn)肽鏈長度決定了蛋白質(zhì)在藻糖存在時的穩(wěn)定性增加。pH依賴性數(shù)據(jù)顯示,雖然蛋白質(zhì)帶點(diǎn)性質(zhì)影響很大,海藻糖因其相比其他糖類在改善溶劑水的結(jié)構(gòu)和特性更出色的表現(xiàn),海藻糖仍能作為一種泛用的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定劑。
  
  根據(jù)平衡常數(shù)K評估蛋白質(zhì)熱變性曲線的熱動力參數(shù),用于N⇔D兩態(tài)可逆轉(zhuǎn)換,其中N代表蛋白質(zhì)天然狀態(tài),D代表變性后狀態(tài)。
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