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注射級(jí)氨丁三醇緩沖液的優(yōu)勢(shì)及注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2022-04-11   點(diǎn)擊次數(shù):7028次

生物緩沖劑在生物化學(xué)研究中有著重要的意義,在免疫印跡、生物芯片及生物雜交等實(shí)驗(yàn)及體外診斷、生物醫(yī)藥等行業(yè)中的應(yīng)用非常廣泛。

生物緩沖劑系統(tǒng)包含幾十個(gè)品種。典型品種如注射級(jí)氨丁三醇、HEPES等。本文將介紹其中尤為常見(jiàn)的品種——注射級(jí)氨丁三醇緩沖劑的優(yōu)點(diǎn)及使用注意事項(xiàng)。

 

一、簡(jiǎn)介:

注射級(jí)氨丁三醇是一種廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥領(lǐng)域的緩沖鹽,全稱三(羥甲基)氨基甲烷,化學(xué)式C4H11NO3,白色結(jié)晶顆粒,CAS號(hào):77-86-1,25°C下的pKa為8.06,常用于蛋白或核酸緩沖液,有效范圍通常是pH 7.0-9.2之間。

注射級(jí)氨丁三醇被用于不同pH條件下的蛋白質(zhì)晶體生長(zhǎng),注射級(jí)氨丁三醇也是蛋白質(zhì)電泳緩沖液的主要成分之一,其在電泳緩沖液中與甘氨酸構(gòu)成緩沖體系,穩(wěn)定電泳過(guò)程中的pH。此外Tris還是制備表面活性劑、硫化促進(jìn)劑和一些藥物的中間物,注射級(jí)氨丁三醇也被用作滴定標(biāo)準(zhǔn)物。

常見(jiàn)的注射級(jí)氨丁三醇緩沖液有Tris-HCl緩沖液、Tris-磷酸鹽緩沖液以及多種衍生緩沖液,如TBS、TE等。

 

二、注射級(jí)氨丁三醇緩沖液優(yōu)點(diǎn)如下:

1. Tris堿的堿性較強(qiáng),所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液,應(yīng)用范圍廣;

2. Tris緩沖液對(duì)生物化學(xué)過(guò)程干擾很小,不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀;

3. Tris在水中溶解度高,對(duì)很多酶的反應(yīng)是惰性的;

4. Tris緩沖能力高,在pH7.5-9.0之間有較強(qiáng)的緩沖能力;

5. Tris緩沖劑應(yīng)用廣泛,在生物化學(xué)、分子生物學(xué)、體外診斷、化妝品、涂料等領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。

 

三、使用注射級(jí)氨丁三醇緩沖劑的注意事項(xiàng):

1. Tris緩沖液的pH值受溫度影響大,△pKa/℃=-0.031 ,例如:4℃時(shí)緩沖液的pH=8.4,則37℃時(shí)的pH=7.4,所以一定要在使用溫度下進(jìn)行配制,室溫下配制的Tris-HCl緩沖液不能用于0℃~4℃。

2. Tris緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大,緩沖液稀釋十倍,pH值的變化大于0.1

3. Tris在一定程度上與各種分子反應(yīng),包括RNA酶抑制劑,醛,酶,DNA以及常見(jiàn)金屬如Cr3+,F(xiàn)e3+,Ni2+,Co2+和Cu2+等,在有些系統(tǒng)中會(huì)起抑制作用,在配制過(guò)程中需考慮與其他組分之間的相互作用;

4. Tris緩沖液易吸收空氣中的CO2,配制的緩沖液要注意蓋嚴(yán)密封;

5. Tris緩沖液對(duì)某些pH電極發(fā)生一定的干擾作用,需使用與注射級(jí)氨丁三醇溶液具有兼容性的電極;

6. Tris緩沖液不適用于二喹啉甲酸(BCA)測(cè)定;

7. 吸入,攝入,皮膚吸收注射級(jí)氨丁三醇可造成傷害,操作時(shí)需戴好手套和護(hù)目鏡;

8. 作為蛋白緩沖液時(shí),若后續(xù)工作需要質(zhì)譜,則不適宜用注射級(jí)氨丁三醇,最好換成其他質(zhì)譜儀可耐受的緩沖液。

 

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